Neurofibromin 2/NF2/Merlin Plasmide Double Nickase (m): sc-421862-NIC

Il gene Nf2 del topo codifica la neurofibromina 2 (Merlin), una proteina di impalcatura tra membrana e citoscheletro che integra i segnali provenienti dalle giunzioni cellula-cellula per limitare la proliferazione e mantenere l’architettura epiteliale. Merlin coordina l’inibizione da contatto e la meccanotrasduzione collegando l’actina corticale alle vie di regolazione della crescita, inclusa la segnalazione Hippo e i programmi trascrizionali a valle mediati da YAP/TAZ. Attraverso queste interazioni, NF2 modula il traffico dei recettori e la dinamica del citoscheletro, influenzando migrazione, polarità e controllo del ciclo cellulare. La disregolazione delle reti associate a NF2 è di ampia rilevanza per gli studi sull’omeostasi tissutale e sui meccanismi oncosoppressori nelle linee cellulari del sistema nervoso e di origine mesenchimale.

Neurofibromin 2/NF2/Merlin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nf2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nf2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nf2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nf2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.