Neuregulin-1/NRG1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400352-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Neuregulin-1/NRG1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Neuregulin-1/NRG1 Double Nickase Plasmid (h) e il Neuregulin-1/NRG1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NRG1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Neuregulin-1/NRG1 Antibody (E-12): sc-393006
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Neuregulin-1/NRG1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400352-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Neuregulin-1/NRG1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400352-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NRG1 codifica la neuregulina-1, un ligando di tipo EGF ancorato alla membrana e anche secreto, che segnala principalmente attraverso le tirosin-chinasi recettoriali ERBB3/ERBB4 per attivare le vie PI3K–AKT e MAPK/ERK. Regola lo sviluppo neuronale e la plasticità sinaptica, le interazioni tra cellule di Schwann e assoni durante la mielinizzazione periferica, nonché la crescita dei cardiomiociti e le risposte allo stress. Lo splicing alternativo genera molteplici isoforme con domini extracellulari distinti e modalità di segnalazione juxtacrina o paracrina, consentendo un controllo specifico del contesto dei programmi di differenziamento, migrazione e sopravvivenza. Una deregolazione della segnalazione NRG1–ERBB è stata collegata a fenotipi neuropsichiatrici, ad alterazioni della mielinizzazione e al rimodellamento di vie oncogeniche, rendendola un bersaglio prezioso per studi meccanicistici sulla comunicazione cellulare e sulla segnalazione dei recettori.
Neuregulin-1/NRG1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NRG1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NRG1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NRG1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NRG1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.