Plásmido CRISPR de Activación (m) Neuregulin-1/NRG1: sc-431734-ACT

La neuregulina-1 (NRG1) es un factor de crecimiento tipo EGF, unido a membrana y también secretado, que señaliza principalmente a través de las tirosina quinasas receptoras ERBB3/ERBB4 para regular la comunicación célula a célula en el sistema nervioso y en otros tejidos. En el ratón, Nrg1 contribuye al desarrollo neuronal, la maduración sináptica, la mielinización por células de Schwann y las interacciones neurogliales, integrándose en las vías PI3K–AKT, MAPK/ERK y en programas transcripcionales posteriores que moldean la diferenciación y la supervivencia. La actividad de NRG1 influye en la formación y la plasticidad de los circuitos y se utiliza ampliamente como un punto de entrada molecular para estudiar la señalización axón–glía y la remodelación dependiente de la actividad. La desregulación de la señalización Nrg1/ERBB se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como con alteraciones en la biología de los nervios periféricos, lo que respalda su relevancia en modelos mecanísticos de enfermedad.

Neuregulin-1/NRG1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nrg1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Neuregulin-1/NRG1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nrg1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nrg1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Neuregulin-1/NRG1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nrg1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Neuregulin-1/NRG1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Neuregulin-1/NRG1 en células tumorales con expresión de Nrg1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.