Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Net Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405945
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Net Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Net, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Net Antibody (11G9): sc-134401
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Net Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405945 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
ELK3 (Net) è un fattore di trascrizione della famiglia ETS che integra la segnalazione MAPK/ERK per regolare programmi di espressione genica dipendenti dal contesto, che controllano angiogenesi, migrazione cellulare e differenziazione. Net funziona come repressore o attivatore trascrizionale a seconda dello stato di fosforilazione e del reclutamento di cofattori, collegando i segnali dei fattori di crescita alle reti geniche immediate-early e vascolari. Attraverso la modulazione di vie che governano il comportamento endoteliale e la plasticità epitelio–mesenchimale, ELK3 è spesso studiato in modelli di progressione tumorale, risposte associate all’ipossia e rimodellamento vascolare. Un’attività deregolata di ELK3 è stata associata a fenotipi invasivi alterati e a una segnalazione angiogenica aberrante in molteplici contesti oncologici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nei circuiti trascrizionali oncogeni.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Net (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELK3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELK3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELK3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Net.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELK3 per lo studio della segnalazione di Net, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni ELK3 critici per la funzione di Net
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELK3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Net CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Net CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELK3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Net Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Net (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELK3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELK3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.