Nek2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421853-NIC

Nek2 (NIMA-related kinase 2) è una chinasi serina/treonina che coordina la separazione dei centrosomi, l’assemblaggio del fuso bipolare e la corretta segregazione dei cromosomi durante la mitosi. Nelle cellule di topo, l’attività di Nek2 si integra con il controllo del ciclo cellulare e con i checkpoint del fuso regolando componenti centrosomiali e la dinamica dei microtubuli, influenzando così la progressione attraverso la fase G2/M e la fedeltà mitotica. Un’espressione o un’attività chinasica di Nek2 deregolata è associata ad amplificazione dei centrosomi, aneuploidia e instabilità genomica, processi frequentemente analizzati in modelli di disturbi proliferativi e del neurosviluppo. In quanto chinasi associata al centrosoma, Nek2 viene comunemente studiata nei percorsi che governano l’ingresso in mitosi, l’organizzazione del fuso e l’accoppiamento tra ciglia e ciclo cellulare.

Nek2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nek2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nek2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nek2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nek2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.