Nebulette Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406565

Panoramica

NEBL codifica la nebulette, una proteina legante l’actina specifica del cuore localizzata nel disco Z, che contribuisce a organizzare i filamenti sottili e a stabilizzare l’architettura del sarcomero nel muscolo striato. La nebulette collega i filamenti di actina alle impalcature della linea Z e contribuisce alla meccanotrasduzione e alla trasmissione della forza durante l’assemblaggio delle miofibrille e la contrazione. Attraverso interazioni con proteine del citoscheletro e del disco Z, NEBL sostiene l’integrità strutturale dei cardiomiociti e i percorsi di rimodellamento responsivi allo stress. Varianti genetiche o un’espressione deregolata di NEBL sono state associate a cardiomiopatie e a disturbi correlati del muscolo cardiaco, rendendolo rilevante per studi sul mantenimento del sarcomero e sulle alterazioni del citoscheletro legate alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nebulette (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NEBL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NEBL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NEBL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nebulette.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NEBL per lo studio della segnalazione di Nebulette, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NEBL critici per la funzione di Nebulette
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NEBL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nebulette CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nebulette CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NEBL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nebulette Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nebulette (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NEBL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NEBL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.