NDR2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404096-ACT

STK38L codifica NDR2, una chinasi serina/treonina del ramo NDR/LATS della rete di segnalazione Hippo, che coordina la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e il rimodellamento del citoscheletro. L’attività di NDR2 è regolata dalla fosforilazione e da interazioni con proteine scaffold, integrando a monte le chinasi MST e segnali calcio-dipendenti per modulare gli output trascrizionali e post-trascrizionali. Attraverso queste vie, STK38L contribuisce al controllo di proliferazione, polarità, migrazione e risposte allo stress, processi spesso alterati nel cancro e in altri disturbi dell’omeostasi tissutale. L’alterazione della segnalazione di NDR2 è stata inoltre collegata a cambiamenti nella differenziazione e nella sopravvivenza neuronale, a supporto della sua rilevanza negli studi dello sviluppo e dei fenotipi cellulari associati alla neurodegenerazione.

NDR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STK38L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NDR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STK38L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STK38L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NDR2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STK38L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NDR2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NDR2 nelle cellule tumorali con espressione di STK38L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.