NDNF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405602-ACT

O fator neurotrófico derivado de neurônios (NDNF) é uma glicoproteína secretada, associada à matriz extracelular, enriquecida no sistema nervoso, que dá suporte à sobrevivência neuronal, ao crescimento de neuritos e à maturação sináptica. No cérebro em desenvolvimento e no adulto, o NDNF contribui para a circuitaria de interneurônios e para a plasticidade dependente de atividade, relacionando-o a processos que moldam a conectividade cortical e o equilíbrio excitatório–inibitório. A expressão alterada de NDNF tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, e é frequentemente estudada em modelos de diferenciação neuronal, responsividade ao estresse e disfunção em nível de circuitos. Essas características fazem do NDNF um alvo útil para investigar programas transcricionais que governam a manutenção neuronal e a estabilidade de redes.

NDNF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NDNF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NDNF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NDNF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NDNF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NDNF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NDNF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NDNF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NDNF em células tumorais com expressão de NDNF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.