NAT-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421825

Panoramica

Il gene murino Nat3 codifica NAT-3, un membro della famiglia delle arilammina N-acetiltransferasi che catalizza reazioni di N-acetilazione dipendenti dall’acetil-CoA coinvolte nella biotrasformazione di xenobiotici. NAT-3 contribuisce alla capacità di detossificazione cellulare modulando la reattività chimica e l’eliminazione di ammine aromatiche e composti correlati, intersecandosi con processi metabolici epatici ed extraepatici. La variabilità dell’attività degli enzimi NAT è ampiamente rilevante per la suscettibilità agli agenti chimici e per le risposte tissutali indotte da tossici, a supporto dell’uso di modelli Nat3 negli studi su stress e infiammazione associati al metabolismo. Nel topo, la perdita di funzione di Nat3 può aiutare a chiarire come il metabolismo dipendente dall’acetilazione influenzi l’omeostasi cellulare a valle in condizioni di esposizione definite.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NAT-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nat3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nat3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nat3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NAT-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nat3 per lo studio della segnalazione di NAT-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nat3 critici per la funzione di NAT-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nat3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NAT-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NAT-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nat3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NAT-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NAT-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nat3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nat3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.