Na⁺ CP type Iβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422819

Panoramica

Scn1b codifica la subunità β1 del canale del sodio (Na+ CP di tipo Iβ), una componente ausiliaria che modula il gating dei canali del sodio voltaggio-dipendenti, la loro espressione sulla superficie cellulare e la stabilità del complesso di canale nelle membrane eccitabili. Oltre a contribuire all’inizio e alla propagazione del potenziale d’azione, SCN1B partecipa alle interazioni neurone–glia e ai processi di adesione cellulare che influenzano l’eccitabilità della rete e la funzione degli assoni mielinizzati. Nel topo, l’attività di Scn1b è strettamente legata a vie che regolano l’eccitabilità di membrana, la trasmissione sinaptica e la suscettibilità alle crisi; inoltre, alterazioni della funzione di β1 sono state associate all’epilessia e a fenotipi neuroevolutivi più ampi. Queste caratteristiche rendono Scn1b un bersaglio utile per analizzare i meccanismi che collegano la regolazione dei canali ionici all’eccitabilità dei circuiti e ai modelli di malattie neurologiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type Iβ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Scn1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Scn1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Scn1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Na+ CP type Iβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Scn1b per lo studio della segnalazione di Na+ CP type Iβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Scn1b critici per la funzione di Na+ CP type Iβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Scn1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Na+ CP type Iβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Na+ CP type Iβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Scn1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Na+ CP type Iβ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Na+ CP type Iβ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Scn1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Scn1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.