NAPRT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406144

Panoramica

NAPRT (nicotinato fosforibosiltransferasi) è un enzima chiave nella biosintesi del NAD che catalizza la conversione dell’acido nicotinico in mononucleotide di acido nicotinico, sostenendo la via di Preiss–Handler. Mantenendo le riserve cellulari di NAD, NAPRT influenza l’omeostasi redox e l’attività degli enzimi NAD-dipendenti coinvolti nel metabolismo, nelle risposte allo stress e nella riparazione del DNA. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di NAPRT sono state associate alla riprogrammazione metabolica e a dipendenze dalle vie di recupero (salvage) del NAD osservate in molteplici contesti patologici, inclusi il cancro e condizioni infiammatorie. Di conseguenza, NAPRT è spesso studiato nei percorsi che regolano il metabolismo energetico, la funzione mitocondriale e la resilienza cellulare allo stress genotossico o ossidativo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NAPRT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NAPRT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NAPRT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NAPRT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NAPRT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NAPRT per lo studio della segnalazione di NAPRT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NAPRT critici per la funzione di NAPRT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NAPRT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NAPRT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NAPRT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NAPRT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NAPRT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NAPRT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NAPRT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NAPRT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.