Nanos2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404123-ACT

Il gene umano **NANOS2** codifica **Nanos2**, una proteina conservata legante l’RNA, nota soprattutto per la regolazione del destino delle cellule germinali attraverso il controllo di programmi di espressione genica post-trascrizionali. Nanos2 partecipa a reti di stabilità dell’mRNA e di repressione della traduzione che contribuiscono a mantenere l’identità della linea germinale e a limitare differenziamenti inappropriati, integrandosi con vie che governano la progressione del ciclo cellulare, l’ingresso in meiosi e la tempistica dello sviluppo. Un’attività alterata della famiglia NANOS è stata associata a difetti nello sviluppo delle cellule germinali e a una biologia riproduttiva deregolata, e l’espressione di **NANOS2** è spesso analizzata come marcatore di specificazione di linea in modelli di sviluppo e di cellule staminali. Queste caratteristiche rendono **NANOS2** un nodo utile per studiare reguloni dell’RNA, reti geniche dello sviluppo e stati trascrizionali dipendenti dal contesto.

Nanos2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NANOS2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nanos2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NANOS2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NANOS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nanos2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NANOS2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nanos2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nanos2 nelle cellule tumorali con espressione di NANOS2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.