NAIF1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410516-ACT

NAIF1 (nuclear apoptosis-inducing factor 1) è una proteina nucleare umana implicata nella regolazione della morte cellulare programmata e nel controllo della proliferazione. Le funzioni riportate collegano NAIF1 a processi associati alla cromatina e a programmi trascrizionali che influenzano la segnalazione apoptotica, collocandola all’interno di reti più ampie di risposta allo stress che modulano le decisioni sul destino cellulare. L’alterata espressione di regolatori dell’apoptosi come NAIF1 è spesso studiata nel contesto della biologia tumorale, in cui cambiamenti nella sopravvivenza cellulare, nelle risposte al danno al DNA e nel controllo della crescita contribuiscono a fenotipi associati alla malattia. NAIF1 rappresenta quindi un nodo utile per analizzare i meccanismi nucleari che collegano la regolazione genica all’apoptosi e agli esiti legati al ciclo cellulare.

NAIF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NAIF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NAIF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NAIF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NAIF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NAIF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NAIF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NAIF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NAIF1 nelle cellule tumorali con espressione di NAIF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.