NaBC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405950

Panoramica

BCAS1 (brain enriched myelin associated protein 1), noto anche come NaBC1, è un gene umano con espressione arricchita nel sistema nervoso centrale ed è ampiamente utilizzato come marcatore delle cellule della linea oligodendrogliale e della mielinizzazione attiva. La sua espressione è associata ai programmi di differenziamento degli oligodendrociti e di formazione della mielina, collegandolo ai processi cellulari che regolano l’isolamento degli assoni e la maturazione della sostanza bianca. Un’alterata espressione di BCAS1/NaBC1 è stata riportata in studi su contesti demielinizzanti e neurodegenerativi, a supporto della sua rilevanza per indagare i meccanismi di perdita e riparazione della mielina. In quanto fattore associato alla linea cellulare, BCAS1 offre un punto di accesso per analizzare le reti trascrizionali e di proteostasi che modellano le transizioni di stato degli oligodendrociti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NaBC1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BCAS1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BCAS1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BCAS1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NaBC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BCAS1 per lo studio della segnalazione di NaBC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BCAS1 critici per la funzione di NaBC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BCAS1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NaBC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NaBC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BCAS1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NaBC1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NaBC1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BCAS1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BCAS1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.