N-Myc Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421918

Panoramica

Mycn codifica il fattore di trascrizione N-Myc, un membro della famiglia MYC che si lega ai motivi E-box per regolare programmi genici che controllano la progressione del ciclo cellulare, il metabolismo biosintetico, la biogenesi dei ribosomi e la determinazione di linea durante lo sviluppo embrionale. Nei sistemi murini, N-Myc è fondamentale per l’espansione dei progenitori neurali e mesenchimali e coordina input di segnalazione provenienti da vie quali PI3K–AKT–mTOR e MAPK per modulare proliferazione e differenziamento. Un’attività deregolata di MYCN è fortemente associata alla trasformazione oncogenica, a uno stato della cromatina alterato e allo stress replicativo, rendendolo un nodo centrale negli studi sulla tumorigenesi e sulla biologia dello sviluppo. Le reti dipendenti da N-Myc intersecano anche le risposte al danno al DNA e l’apoptosi, consentendo un’analisi meccanicistica del controllo della crescita e delle decisioni sul destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO N-Myc (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mycn in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mycn insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mycn a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina N-Myc.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mycn per lo studio della segnalazione di N-Myc, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mycn critici per la funzione di N-Myc
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mycn per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal N-Myc CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal N-Myc CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mycn. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal N-Myc Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR N-Myc (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mycn per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mycn definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.