N-cadherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400109-ACT

CDH2 codifica a N-caderina, um recetor de adesão célula–célula dependente de cálcio que medeia ligação homofílica nas junções aderentes e organiza a arquitetura dos tecidos durante o desenvolvimento e a remodelação. Ao acoplar-se às cateninas e ao citoesqueleto de actina, a N-caderina regula a sinalização dependente de contacto, a polaridade celular e a migração, intersetando-se com vias que influenciam a transição epitélio–mesênquima, a mecanotransdução e a comunicação cruzada com recetores de fatores de crescimento. A expressão alterada de CDH2 está associada a mudanças na capacidade invasiva celular, na conectividade sináptica e nas interações com o estroma, tornando-o relevante para estudos sobre progressão do cancro, fibrose e processos do neurodesenvolvimento. Como molécula de adesão de superfície, a N-caderina também é utilizada como marcador de estados do tipo mesenquimal e de regulação dinâmica de junções celulares em diversos modelos de células humanas.

N-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

N-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de N-cadherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de N-cadherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via N-cadherin em células tumorais com expressão de CDH2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.