Myozenin 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406184

Panoramica

MYOZ3 codifica la miozenina 3, una proteina associata al disco Z che contribuisce all’organizzazione sarcomerica collegando componenti strutturali a complessi di segnalazione nel muscolo striato. I membri della famiglia delle miozenine interagiscono con l’α-actinina e con modulatori della segnalazione calcineurina–NFAT, implicando MYOZ3 in vie che accoppiano il carico meccanico al rimodellamento trascrizionale e al mantenimento delle fibre muscolari. La disregolazione dell’architettura del disco Z e della segnalazione dipendente dalla calcineurina è rilevante negli studi sull’integrità delle miofibrille, sulla contrattilità e sulle risposte adattative allo stress nel muscolo scheletrico e cardiaco. MYOZ3 rappresenta quindi un bersaglio utile per analizzare l’interazione tra citoscheletro e trasduzione del segnale nella biologia muscolare e in sistemi modello di malattia correlati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myozenin 3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MYOZ3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MYOZ3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MYOZ3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myozenin 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MYOZ3 per lo studio della segnalazione di Myozenin 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MYOZ3 critici per la funzione di Myozenin 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MYOZ3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Myozenin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Myozenin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MYOZ3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Myozenin 3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Myozenin 3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MYOZ3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MYOZ3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.