Myotilin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406960

Panoramica

MYOT codifica la miotilina, una proteina citoscheletrica localizzata a livello del disco Z che si lega a componenti associati all’actina per sostenere l’organizzazione del sarcomero e la stabilità meccanica nel muscolo striato. La miotilina partecipa alla miofibrillogenesi e al mantenimento dell’architettura del disco Z attraverso interazioni con proteine quali l’α-actinina e la filamina C, influenzando la segnalazione del citoscheletro e la meccano-trasduzione. L’alterazione della funzione di MYOT è associata a miopatie miofibrillari e ad altri disturbi muscolari correlati, caratterizzati da disintegrazione del disco Z e aggregazione proteica, rendendolo rilevante per studi sull’integrità muscolare e sulle risposte allo stress. In quanto hub strutturale nel tessuto contrattile, la miotilina è spesso analizzata in vie che regolano la differenziazione muscolare, il controllo della qualità proteica e il rimodellamento del citoscheletro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myotilin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MYOT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MYOT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MYOT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myotilin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MYOT per lo studio della segnalazione di Myotilin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MYOT critici per la funzione di Myotilin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MYOT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Myotilin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Myotilin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MYOT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Myotilin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Myotilin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MYOT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MYOT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.