Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-436163

概要

Myo18aは、非典型的なアクチン依存性モーター／足場タンパク質であるミオシンXVIIIaをコードしており、動的なアクチンネットワークに局在して、細胞骨格の構築、膜リモデリング、細胞形状の制御に寄与します。ミオシンXVIIIaは、アクチンフィラメントの組み立てや収縮性構造の協調を介して、細胞移動、接着、細胞内輸送などの過程に関与することが示されています。マウス系では、Myo18aの機能は、組織形態形成、神経細胞および免疫細胞の運動性、ならびにメカノトランスダクション経路の制御といった文脈で研究されることが一般的です。アクチン—ミオシン構造とそれに関連するシグナル伝達の破綻は、発生異常や、浸潤・転移の生物学に関わるがん関連の表現型に影響を及ぼし得ます。

Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMyo18a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Myo18a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Myo18aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin XVIIIaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin XVIIIaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Myo18a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin XVIIIaの機能に不可欠なMyo18aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Myo18aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMyosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Myo18a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin XVIIIa HDRプラスミド（m）および Myosin XVIIIa HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMyo18aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMyo18a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。