Myosin XVIIIa Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-436163

Panoramica

Myo18a codifica la miosina XVIIIa, un motore/impalcatura non convenzionale basato sull’actina che si localizza in reti di actina dinamiche e contribuisce all’organizzazione del citoscheletro, al rimodellamento di membrana e al controllo della forma cellulare. La miosina XVIIIa è stata collegata a processi quali migrazione cellulare, adesione e traffico intracellulare attraverso il coordinamento dell’assemblaggio dei filamenti di actina e delle strutture contrattili. Nei modelli murini, la funzione di Myo18a viene comunemente studiata nel contesto della morfogenesi tissutale, della motilità di cellule neuronali e immunitarie e della regolazione delle vie di meccanotrasduzione. Un’architettura actina–miosina deregolata e la segnalazione associata possono influenzare fenotipi rilevanti per anomalie dello sviluppo e per cambiamenti legati al cancro nella biologia di invasione e metastasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin XVIIIa (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Myo18a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Myo18a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Myo18a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myosin XVIIIa.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Myo18a per lo studio della segnalazione di Myosin XVIIIa, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Myo18a critici per la funzione di Myosin XVIIIa
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Myo18a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Myosin XVIIIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Myo18a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Myosin XVIIIa Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Myosin XVIIIa (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Myo18a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Myo18a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.