Myosin XVIIIA Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403216-ACT

Il gene umano **MYO18A** codifica la **miosina XVIIIA**, un motore non convenzionale associato all’actina, implicato nell’organizzazione del citoscheletro corticale, nella regolazione della forma cellulare e nel coordinamento del trasporto intracellulare e delle dinamiche legate all’adesione. Attraverso interazioni con la **F-actina** e con complessi di scaffolding, MYO18A contribuisce a processi quali il traffico vescicolare, l’organizzazione dell’apparato di Golgi e il rimodellamento associato alla migrazione, che si intrecciano con la segnalazione delle **GTPasi Rho** e con le vie di meccanotrasduzione. Alterazioni dell’espressione di MYO18A e la disregolazione del citoscheletro sono state studiate nel contesto del comportamento cellulare invasivo e di segnali proliferativi aberranti, a supporto della sua rilevanza in fenotipi associati a malattia. Queste caratteristiche rendono MYO18A un nodo utile per studiare come i motori basati sull’actina accoppiano il traffico di membrana all’architettura del citoscheletro nelle cellule umane.

Myosin XVIIIa Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYO18A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Myosin XVIIIa Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYO18A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYO18A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Myosin XVIIIa. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYO18A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Myosin XVIIIa nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Myosin XVIIIa nelle cellule tumorali con espressione di MYO18A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.