Myosin X Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402204-ACT

Il gene umano **MYO10** codifica per la **miosina X**, un motore non convenzionale basato sull’actina, arricchito alle estremità dei filopodi, che sostiene l’inizio e l’allungamento dei filopodi, il trasporto di carichi e il rimodellamento polarizzato della membrana. La miosina X coordina il traffico delle integrine e la maturazione delle adesioni, collegando la dinamica dell’actina alla migrazione cellulare, alla crescita dei neuriti e ai processi di guida. Attraverso interazioni con la segnalazione dei fosfoinositidi e con regolatori del citoscheletro, MYO10 contribuisce a vie che controllano la motilità protrusiva e il rilevamento della matrice extracellulare. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di MYO10 sono state associate a fenotipi cellulari invasivi e a una morfogenesi deregolata, rendendolo un nodo utile per studiare meccanismi dipendenti dal citoscheletro rilevanti per la biologia del cancro e la ricerca sullo sviluppo neurobiologico.

Myosin X Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYO10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Myosin X Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYO10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYO10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Myosin X. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYO10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Myosin X nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Myosin X nelle cellule tumorali con espressione di MYO10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.