Myosin If Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403977-ACT

MYO1F codifica la miosina If, una proteina motoria actina-dipendente arricchita nelle cellule ematopoietiche che supporta la dinamica di membrana, il rimodellamento dell’actina corticale e la generazione di forza durante l’adesione e la migrazione. La miosina If contribuisce al traffico vescicolare, alla formazione della coppa fagocitica e all’organizzazione del citoscheletro associata alle integrine, collegando la motilità guidata dall’ATP alla polarità e alla segnalazione delle cellule immunitarie. Un’espressione o una funzione alterate di MYO1F sono state associate a una motilità leucocitaria disregolata e a risposte infiammatorie anomale, rendendolo rilevante per studi sull’omeostasi immunitaria e sui meccanismi delle malattie immunomediate. La sua attività interagisce con vie regolatorie dell’actina che coordinano endocitosi, chemiotassi e architettura della sinapsi immunitaria.

Myosin If Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYO1F senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Myosin If Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYO1F nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYO1F, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Myosin If. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYO1F nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Myosin If nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Myosin If nelle cellule tumorali con espressione di MYO1F silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.