Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Myosin Ib Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403530
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Myosin Ib Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Myosin Ib, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Myosin Ib Antibody (F-8): sc-393053
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Myosin Ib Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403530 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
MYO1B codifica la miosina Ib, un motore associato alla membrana e dipendente dall’actina che contribuisce alla tensione corticale e al rimodellamento dinamico della membrana plasmatica. La miosina Ib partecipa al traffico endocitico, alla formazione di ruffle di membrana e all’organizzazione della rete di actina accoppiando la generazione di forza a membrane ricche di fosfoinositidi. Attraverso queste funzioni influenza la polarità cellulare, l’adesione e la migrazione, processi che si intrecciano con vie di segnalazione che regolano la dinamica del citoscheletro e il trasporto vescicolare. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di MYO1B sono state studiate in contesti di comportamento cellulare invasivo e di architettura epiteliale disregolata, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici sul rimodellamento della corteccia di actina associato a patologie.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Ib (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MYO1B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MYO1B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MYO1B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myosin Ib.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MYO1B per lo studio della segnalazione di Myosin Ib, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni MYO1B critici per la funzione di Myosin Ib
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MYO1B per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Myosin Ib CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Myosin Ib CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MYO1B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Myosin Ib Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Myosin Ib (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MYO1B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MYO1B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.