MyoD Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400092-LAC

Il gene umano **MYOD1** codifica **MyoD**, un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix che funge da regolatore principale dell’impegno miogenico scheletrico e della differenziazione. MyoD si lega ai motivi **E-box** per attivare i programmi genici muscolari e coopera con rimodellatori della cromatina e fattori di linea per promuovere l’uscita dal ciclo cellulare e la formazione di miotubi, integrando segnali provenienti dalle reti dei fattori regolatori miogenici e dal controllo epigenetico della trascrizione. L’attività di MYOD1 interseca vie che governano lo sviluppo muscolare, la rigenerazione e la plasticità di linea, e la sua deregolazione è stata implicata in stati differenziativi alterati e in programmi miogenici associati ai tumori in alcuni tipi di cancro. In quanto nodo dei circuiti trascrizionali, MYOD1 è ampiamente utilizzato per studiare reti di regolazione genica, cambiamenti nell’accessibilità della cromatina e fenotipi associati alla miogenesi in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale MyoD (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MYOD1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MyoD (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MYOD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MyoD. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MYOD1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.