MyoD Plasmide Double Nickase (h): sc-400092-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MyoD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MyoD Double Nickase Plasmid (h) e il MyoD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MYOD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MyoD Antibody (E-1): sc-377186
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MyoD Plasmide Double Nickase (h) | sc-400092-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MyoD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400092-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MYOD1 codifica MyoD, un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix che funge da regolatore principale della miogenesi scheletrica legandosi ai motivi E-box e coordinando il rimodellamento della cromatina con l’espressione genica specifica di linea. MyoD integra segnali provenienti dalle reti dei fattori regolatori miogenici e si interseca con le vie di segnalazione Notch, Wnt/β-catenina, TGF-β e MAPK per bilanciare proliferazione e differenziamento dei progenitori. Attraverso interazioni cooperative e antagonistiche con fattori come MYOG, MEF2 e le proteine ID, promuove l’impegno dei mioblasti, l’uscita dal ciclo cellulare e i programmi genici delle proteine strutturali del muscolo. La disregolazione dell’attività di MYOD1 è rilevante per la compromissione della rigenerazione muscolare e per la biologia delle malattie neuromuscolari, e le alterazioni di MYOD1 sono studiate nel contesto dei tumori miogenici e della plasticità di linea.
MyoD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MYOD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MYOD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MYOD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MYOD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.