MYG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405754

Panoramica

C12orf10 codifica MYG1, una nucleasi conservata coinvolta nel metabolismo dell’RNA e nel mantenimento del genoma, con un’attività riportata nei confronti di substrati di RNA e ruoli nel processamento dell’RNA sia mitocondriale sia nucleare. MYG1 è stata associata alla regolazione dell’espressione genica mitocondriale e dell’omeostasi energetica cellulare, collegandola a vie che coordinano il turnover dell’RNA, la fosforilazione ossidativa e programmi trascrizionali adattativi allo stress. L’alterazione della funzione di MYG1 può compromettere il controllo qualità dell’RNA e la funzionalità degli organelli, processi spesso associati, in contesti rilevanti per la malattia, a proliferazione alterata, squilibri della proteostasi e segnalazione infiammatoria. Queste caratteristiche rendono MYG1 un bersaglio utile per studi meccanicistici delle reti di processamento dell’RNA e della comunicazione mitocondrio–nucleo nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MYG1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C12orf10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C12orf10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C12orf10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MYG1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C12orf10 per lo studio della segnalazione di MYG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C12orf10 critici per la funzione di MYG1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C12orf10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MYG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MYG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C12orf10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MYG1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MYG1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C12orf10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C12orf10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.