Myf-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421777

Panoramica

Myf6 (Myf-6; noto anche come MRF4) codifica un fattore di trascrizione basic helix-loop-helix all’interno della rete dei fattori regolatori miogenici, che orchestra la specificazione della linea del muscolo scheletrico e la differenziazione terminale. Myf-6 partecipa alla maturazione dei mioblasti, al mantenimento dei miotubi e all’espressione genica delle fibre muscolari attraverso interazioni cooperative e in parte ridondanti con MYOD1, MYF5 e MYOG, influenzando programmi trascrizionali legati all’assemblaggio del sarcomero e al rimodellamento metabolico. Nel topo, Myf6 è ampiamente utilizzato per studiare la miogenesi durante lo sviluppo e nell’adulto, l’adattamento neuromuscolare e la regolazione del tipo di fibra, nonché i meccanismi di debolezza e degenerazione muscolare in modelli genetici e basati su lesione. L’alterazione della trascrizione regolata da Myf6 rappresenta un punto di accesso maneggevole per analizzare i circuiti di regolazione genica miogenici e il controllo dell’identità muscolare dipendente dalla cromatina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myf-6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Myf6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Myf6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Myf6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myf-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Myf6 per lo studio della segnalazione di Myf-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Myf6 critici per la funzione di Myf-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Myf6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Myf-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Myf-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Myf6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Myf-6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Myf-6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Myf6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Myf6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.