Myf-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400449

Panoramica

MYF5 codifica il fattore regolatore miogenico umano Myf-5, un fattore di trascrizione della famiglia basic helix-loop-helix che agisce precocemente nella determinazione della linea del muscolo scheletrico e nell’impegno dei mioblasti. Myf-5 regola programmi di espressione genica che guidano la differenziazione miogenica tramite eterodimerizzazione con le E-proteine e legame ai motivi E-box in elementi regolatori specifici del muscolo. Opera all’interno di reti di sviluppo che coordinano la miogenesi, inclusa la regolazione incrociata con altri membri della famiglia MRF come MYOD1 e MYOG, influenzando le decisioni sul destino cellulare e la tempistica della differenziazione. La disregolazione del controllo trascrizionale associato a MYF5 è rilevante per studi su miopatie congenite, difetti di rigenerazione muscolare e contesti tumorali che mostrano espressione aberrante di fattori miogenici o un blocco della differenziazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myf-5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MYF5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MYF5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MYF5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myf-5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MYF5 per lo studio della segnalazione di Myf-5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MYF5 critici per la funzione di Myf-5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MYF5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Myf-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Myf-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MYF5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Myf-5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Myf-5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MYF5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MYF5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.