MUS81 Plasmide Double Nickase (h): sc-402664-NIC

MUS81 codifica un’endonucleasi specifica per la struttura del DNA che forma un eterodimero con EME1/EME2 per risolvere forche di replicazione bloccate e intermedi della ricombinazione, come strutture simili alle giunzioni di Holliday. Agisce nelle vie di risposta al danno al DNA e allo stress replicativo, coordinandosi con la ricombinazione omologa e la segnalazione dei checkpoint per preservare la stabilità del genoma. L’attività di MUS81 contribuisce alla corretta segregazione cromosomica e limita l’accumulo di intermedi di DNA tossici durante la fase S. Un’elaborazione dipendente da MUS81 deregolata è stata associata a un’aumentata instabilità genomica e a una sensibilità alterata allo stress replicativo in contesti legati al cancro, rendendolo un bersaglio comune negli studi meccanicistici sulla riparazione del DNA.

MUS81 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MUS81 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MUS81. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MUS81. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MUS81 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.