MuRF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400797

Panoramica

TRIM63 codifica per la ligasi E3 ubiquitina muscolo-specifica MuRF1, una proteina con dominio RING-finger che si localizza nelle strutture sarcomeriche e promuove il turnover ubiquitina-dipendente di proteine contrattili e regolatorie. MuRF1 agisce all’interno del sistema ubiquitina–proteasoma e si coordina con l’autofagia e con la segnalazione delle risposte allo stress per rimodellare le miofibrille durante la deprivazione di nutrienti, la denervazione e in presenza di segnali infiammatori. La sua regolazione trascrizionale e post-traduzionale interseca i programmi di atrogeni guidati da FOXO, la segnalazione insulina/IGF-1–AKT e le vie cataboliche associate a NF-κB. Un’attività disfunzionale di TRIM63 è collegata a fenotipi di atrofia del muscolo scheletrico e ad alterazioni dell’omeostasi muscolare, rendendolo un nodo rilevante per studi su proteostasi, metabolismo e meccanismi di deperimento muscolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MuRF1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRIM63 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRIM63 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRIM63 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MuRF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRIM63 per lo studio della segnalazione di MuRF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TRIM63 critici per la funzione di MuRF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRIM63 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MuRF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MuRF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRIM63. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MuRF1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MuRF1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRIM63 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRIM63 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.