Mucin 5B/MUC5B Plasmide Double Nickase (h): sc-401077-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Mucin 5B/MUC5B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Mucin 5B/MUC5B Double Nickase Plasmid (h) e il Mucin 5B/MUC5B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MUC5B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Mucin 5B/MUC5B Antibody (5B#19-2E): sc-21768
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Mucin 5B/MUC5B Plasmide Double Nickase (h) | sc-401077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mucin 5B/MUC5B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUC5B codifica la mucina 5B, una mucina secreta ad alto peso molecolare, gel-formante, fortemente O-glicosilata, che polimerizza tramite legami disolfuro per formare la barriera mucosa nelle vie aeree e in altri epiteli mucosali. Questa barriera regola la clearance mucociliare, l’idratazione e la difesa innata modulando le proprietà viscoelastiche del muco e influenzando le interazioni con microbi e particolato. L’espressione di MUC5B è controllata da programmi di differenziamento epiteliale e da vie di segnalazione infiammatoria, incluse risposte trascrizionali guidate da citochine e la processazione secretoria RE–Golgi che supporta la biosintesi delle mucine. Livelli deregolati di MUC5B o proprietà alterate del muco sono stati implicati in malattie croniche delle vie aeree e nella patologia fibrotica polmonare, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio dell’omeostasi epiteliale e dei meccanismi di difesa mucosale.
Mucin 5B/MUC5B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MUC5B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MUC5B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MUC5B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MUC5B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.