Mucin 5B/MUC5B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401077

Panoramica

MUC5B codifica la mucina 5B, una mucina secretata ad alto peso molecolare, formante gel, che rappresenta un importante componente strutturale del muco delle vie aeree e della saliva. Attraverso un’estesa O‑glicosilazione e la polimerizzazione, MUC5B contribuisce alla clearance mucociliare, alla cattura dei patogeni e all’omeostasi della barriera epiteliale; la sua espressione è regolata da programmi infiammatori e di differenziamento negli epiteli secretori. Alterazioni dell’abbondanza di MUC5B o delle sue proprietà reologiche sono collegate a un trasporto del muco disfunzionale e al rimodellamento cronico delle vie aeree; inoltre, variazioni genetiche e di espressione sono state associate a fenotipi di fibrosi polmonare e a malattie polmonari muco‑ostruttive. In quanto glicoproteina secretata ricca di possibili readout, MUC5B è ampiamente studiata in contesti di differenziamento epiteliale, di processamento secretorio nel RE/Golgi e di segnalazione della difesa innata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 5B/MUC5B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MUC5B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MUC5B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MUC5B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mucin 5B/MUC5B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MUC5B per lo studio della segnalazione di Mucin 5B/MUC5B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MUC5B critici per la funzione di Mucin 5B/MUC5B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MUC5B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mucin 5B/MUC5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Mucin 5B/MUC5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MUC5B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mucin 5B/MUC5B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Mucin 5B/MUC5B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MUC5B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MUC5B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.