Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mucin 4/MUC4: sc-400329-ACT

MUC4 code pour la mucine 4, une glycoprotéine transmembranaire de haut poids moléculaire qui contribue à la fonction de barrière épithéliale, à la lubrification et à la signalisation à la surface cellulaire via son domaine extracellulaire fortement O‑glycosylé. La mucine 4 participe aux interactions cellule–cellule et cellule–matrice et peut moduler la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, notamment les voies associées à ERBB2/HER2 qui influencent la prolifération, la différenciation et la survie. Des altérations de l’expression de MUC4 et des profils de ses glycoformes sont associées à une dérégulation de l’adhésion, au remodelage épithélial et à des microenvironnements inflammatoires dans de nombreuses maladies d’origine épithéliale. Parce que MUC4 affecte l’architecture de surface et les sorties de signalisation, elle est largement étudiée dans des modèles de biologie des muqueuses, de polarité épithéliale et de phénotypes associés aux tumeurs.

Mucin 4/MUC4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUC4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mucin 4/MUC4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUC4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUC4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mucin 4/MUC4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUC4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mucin 4/MUC4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mucin 4/MUC4 dans les cellules tumorales présentant une expression de MUC4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.