Mucin 12/MUC12 Plasmide Double Nickase (h): sc-400505-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Mucin 12/MUC12 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Mucin 12/MUC12 Double Nickase Plasmid (h) e il Mucin 12/MUC12 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MUC12. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Mucin 12/MUC12 Antibody (B-9): sc-377269
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Mucin 12/MUC12 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400505-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mucin 12/MUC12 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400505-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUC12 codifica la mucina 12, una mucina associata alla membrana arricchita sulle superfici epiteliali, dove il suo dominio extracellulare fortemente O-glicosilato contribuisce al glicocalice protettivo, all’integrità della barriera e alle interazioni cellula–cellula. Attraverso effetti sull’architettura della membrana apicale e sul crosstalk di segnalazione dipendente dalle mucine, MUC12 può influenzare i programmi di differenziazione epiteliale, le dinamiche di adesione e le risposte agli stimoli infiammatori. Pattern alterati di espressione delle mucine, inclusa la disregolazione di MUC12, sono spesso studiati nel contesto del rimodellamento epiteliale, dell’infiammazione cronica e della biologia delle malattie gastrointestinali. In quanto glicoproteina di superficie con estese modificazioni glicani, MUC12 è rilevante anche per studi sulle vie di glicosilazione e su come la composizione del glicocalice moduli l’omeostasi tissutale.
Mucin 12/MUC12 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MUC12 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MUC12. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MUC12. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MUC12 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.