MTSS1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404758-LAC

MTSS1 umano (metastasis suppressor 1), noto anche come MIM, codifica una proteina adattatrice contenente un dominio I-BAR che collega il rilevamento della curvatura di membrana al rimodellamento del citoscheletro di actina. MTSS1 partecipa a processi quali la dinamica di lamellipodi e filopodi, l’endocitosi e la regolazione della forma e della motilità cellulare attraverso reti di segnalazione associate all’actina. Interseca vie che controllano l’organizzazione del citoscheletro e la segnalazione guidata dai recettori, influenzando fenotipi di adesione e migrazione. Un’espressione deregolata di MTSS1 è stata collegata a un comportamento invasivo alterato e alla progressione in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo utile per lo studio di meccanismi patologici dipendenti dal citoscheletro.

Le particelle di attivazione lentivirale MTSS1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MTSS1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MTSS1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MTSS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MTSS1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MTSS1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.