MTSS1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404758-ACT

MTSS1 umano (metastasis suppressor 1) codifica una proteina adattatrice contenente un dominio I-BAR, che collega membrane ricche di fosfoinositidi alle reti regolatorie dell’actina, modellando la curvatura di membrana e coordinando il rimodellamento del citoscheletro. MTSS1 partecipa a processi che includono la dinamica di lamellipodi e filopodi, l’endocitosi e l’adesione cellula-cellula, attraverso interazioni con fattori associati all’actina e con vie di segnalazione dipendenti da piccole GTPasi. Modulando la motilità cellulare e il comportamento invasivo, MTSS1 è spesso studiato nel contesto della differenziazione epiteliale, della progressione tumorale e di fenotipi associati alla metastasi. Un’alterata espressione di MTSS1 è stata inoltre collegata a cambiamenti in programmi di sviluppo e in stati trascrizionali responsivi allo stress, rilevanti per la biologia del cancro e per modelli di ricerca in neurobiologia.

MTSS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MTSS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MTSS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MTSS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MTSS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MTSS1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MTSS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MTSS1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MTSS1 nelle cellule tumorali con espressione di MTSS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.