Plásmido CRISPR de Activación (h) MTMR8/9: sc-413097-ACT

MTMR9 codifica una proteína de la familia de las miotubularinas que participa en la señalización de fosfoinosítidos mediante interacciones con miotubularinas catalíticamente activas, influyendo en el equilibrio celular de fosfatidilinositol 3‑fosfato y fosfatidilinositol (3,5)‑bisfosfato. A través de estas vías dependientes de lípidos, los complejos asociados a MTMR8/9 están implicados en el tráfico endosomal, la remodelación de membranas y la regulación aguas abajo de procesos de detección de nutrientes y relacionados con la autofagia. MTMR9 se ha vinculado a fenotipos metabólicos y a contextos de señalización relacionados con la insulina en estudios genéticos y funcionales, y se ha descrito una expresión alterada en conjuntos de datos asociados a enfermedades, incluido el cáncer. Estas características hacen de MTMR9 una diana útil para estudiar el control dependiente de fosfoinosítidos de la dinámica vesicular y la regulación del estado celular.

MTMR8/9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MTMR9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MTMR8/9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MTMR9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MTMR9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MTMR8/9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MTMR9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MTMR8/9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MTMR8/9 en células tumorales con expresión de MTMR9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.