MTMR7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405863

Panoramica

MTMR7 codifica la myotubularin related protein 7, una fosfatasi lipidica cataliticamente attiva che defosforila il fosfatidilinositolo 3-fosfato e il fosfatidilinositolo (3,5)-bisfosfato, modulando così il traffico di membrana dipendente dai fosfoinositidi. Attraverso la regolazione della dinamica endosomiale, del riciclo dei recettori e della maturazione delle vescicole, MTMR7 contribuisce al controllo degli output di segnalazione di vie quali EGFR/MAPK e reti associate a PI3K. Alterazioni dell’attività di MTMR7 sono state collegate a fenotipi di proliferazione e migrazione cellulare deregolate, a supporto della sua rilevanza negli studi sulla segnalazione oncogenica e sull’omeostasi epiteliale. Il suo ruolo nel turnover dei fosfoinositidi si interseca anche con processi più ampi, tra cui l’autofagia e la funzione lisosomiale, spesso perturbati in stati cellulari associati a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MTMR7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MTMR7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MTMR7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MTMR7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MTMR7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MTMR7 per lo studio della segnalazione di MTMR7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MTMR7 critici per la funzione di MTMR7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MTMR7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MTMR7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MTMR7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MTMR7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MTMR7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MTMR7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MTMR7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MTMR7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.