MTFmt Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407106

Panoramica

MTFMT codifica la metionil-tRNA formiltransferasi mitocondriale (MTFmt), un enzima che formila il Met-tRNA^Met iniziatore per generare fMet-tRNA, un substrato chiave per l’avvio della traduzione mitocondriale. Questa attività supporta la sintesi efficiente dei componenti della fosforilazione ossidativa (OXPHOS) codificati dal DNA mitocondriale e contribuisce a mantenere l’integrità della catena respiratoria e la produzione di ATP. L’alterazione di MTFmt compromette la proteostasi mitocondriale e può innescare risposte di stress bioenergetico, collegando il gene a vie che regolano l’espressione genica mitocondriale, il trasporto di elettroni e l’omeostasi metabolica. Varianti patogene o una funzione ridotta sono associate a difetti della traduzione mitocondriale e a fenotipi compatibili con una carenza combinata di OXPHOS, rendendo MTFMT un bersaglio rilevante negli studi sui meccanismi delle malattie mitocondriali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MTFmt (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MTFMT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MTFMT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MTFMT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MTFmt.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MTFMT per lo studio della segnalazione di MTFmt, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MTFMT critici per la funzione di MTFmt
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MTFMT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MTFmt CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MTFmt CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MTFMT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MTFmt Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MTFmt (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MTFMT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MTFMT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.