MTAP Plasmide Double Nickase (h): sc-406223-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MTAP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MTAP Double Nickase Plasmid (h) e il MTAP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MTAP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MTAP Antibody (42-T): sc-100782
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MTAP Plasmide Double Nickase (h) | sc-406223-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MTAP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406223-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MTAP (metiltioadenosina fosforilasi) è un enzima chiave della via di recupero della metionina che catalizza la fosforolisi della 5′-metiltioadenosina generata durante la biosintesi delle poliammine. Riciclando metionina e adenina, MTAP contribuisce all’omeostasi dei nucleotidi, al potenziale di metilazione e all’equilibrio metabolico cellulare, collegando il metabolismo delle purine ai processi a un carbonio e a quelli legati alle poliammine. La perdita o la ridotta espressione di MTAP è frequentemente osservata in regioni genomiche adiacenti a CDKN2A/B ed è ampiamente studiata per il suo impatto sulle dipendenze metaboliche associate ai tumori e sulle reti di metilazione alterate. La perturbazione di MTAP è quindi rilevante per studi sulla riprogrammazione metabolica, la regolazione epigenetica e la segnalazione adattativa allo stress nelle cellule umane.
MTAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MTAP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MTAP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MTAP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MTAP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.