MTA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401698-ACT

MTA2 umano (metastasis associated 1 family member 2) è un componente centrale del complesso NuRD (nucleosome remodeling and deacetylase), che integra il rimodellamento della cromatina dipendente da ATP con la deacetilazione degli istoni per regolare programmi di repressione trascrizionale. Attraverso interazioni con HDAC1/2, CHD3/4 e proteine leganti il metil-CpG, MTA2 contribuisce al controllo epigenetico della progressione del ciclo cellulare, delle risposte al danno al DNA e della differenziazione specifica di linea. Alterazioni dell’espressione di MTA2 e dell’attività di NuRD sono state associate a stati trascrizionali oncogenici, alla transizione epitelio–mesenchimale e a fenotipi invasivi in molteplici contesti tumorali, rendendolo un bersaglio frequente negli studi sui meccanismi di malattia guidati dalla cromatina. La regolazione di reti geniche dipendente da MTA2 interseca anche vie di segnalazione che modellano proliferazione e adattamento allo stress, supportandone l’uso come nodo per analizzare la plasticità trascrizionale.

MTA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MTA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MTA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MTA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MTA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MTA2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MTA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MTA2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MTA2 nelle cellule tumorali con espressione di MTA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.