MTA1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400942-ACT

Humanes MTA1 (Metastasis Associated 1) ist ein chromatinregulatorischer Faktor, der vor allem als Kernbestandteil des NuRD‑Komplexes (nucleosome remodeling and deacetylase) bekannt ist. Er verknüpft ATP‑abhängiges Chromatin‑Remodeling mit Histon‑Deacetylierung, um Transkriptionsprogramme zu modulieren. Durch Interaktionen mit HDAC1/2, CHD3/4 und weiteren NuRD‑Untereinheiten beeinflusst MTA1 die epigenetische Kontrolle der Genexpression, DNA‑Schadensantworten und Zellzustandsübergänge wie die epithelial‑mesenchymale Plastizität. MTA1 wurde in Signalwegen untersucht, die Proliferation, Migration und Stresssignalgebung steuern, und eine veränderte Expression ist bei vielen Krebsarten häufig mit aggressiven Tumorphänotypen und metastatischem Verhalten assoziiert. Seine Rolle bei der Umgestaltung der Zugänglichkeit von Enhancern und Promotoren macht es zu einem nützlichen Ziel, um Transkriptionsnetzwerke zu analysieren, die den Chromatinzustand mit onkogenen und inflammatorischen Signalen koppeln.

MTA1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MTA1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MTA1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MTA1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MTA1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MTA1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MTA1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MTA1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MTA1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MTA1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.