MTA1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400942-ACT

L’MTA1 umano (metastasis associated 1) è un fattore di regolazione della cromatina, noto soprattutto come componente centrale del complesso NuRD (nucleosome remodeling and deacetylase), che collega il rimodellamento della cromatina dipendente dall’ATP alla deacetilazione degli istoni per modulare i programmi trascrizionali. Attraverso interazioni con HDAC1/2, CHD3/4 e altre subunità del NuRD, MTA1 influenza il controllo epigenetico dell’espressione genica, le risposte al danno al DNA e le transizioni di stato cellulare, come la plasticità epitelio-mesenchimale. MTA1 è stato studiato in vie che regolano proliferazione, migrazione e segnalazione da stress, e la sua espressione alterata è frequentemente associata a fenotipi tumorali aggressivi e a comportamento metastatico in molteplici tipi di cancro. Il suo ruolo nel rimodellare l’accessibilità di enhancer e promotori lo rende un bersaglio utile per analizzare reti trascrizionali che collegano lo stato della cromatina alla segnalazione oncogenica e infiammatoria.

MTA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MTA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MTA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MTA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MTA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MTA1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MTA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MTA1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MTA1 nelle cellule tumorali con espressione di MTA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.