MSY2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405504

Panoramica

YBX2 codifica MSY2, una proteina Y-box conservata in grado di legare RNA/DNA, che riconosce i motivi Y-box e regola l’espressione genica post-trascrizionale attraverso la stabilizzazione, l’immagazzinamento e il controllo della traduzione degli mRNA. MSY2 è nota soprattutto per i suoi ruoli nella biologia delle cellule germinali e nella spermatogenesi, dove contribuisce all’assemblaggio dei complessi mRNP e alla tempistica della sintesi proteica durante la differenziazione meiotica e post-meiotica. Nei contesti somatici, le proteine della famiglia Y-box interagiscono con i processi di maturazione dell’RNA, con i programmi di risposta allo stress e con le transizioni di stato cellulare che influenzano proliferazione e sopravvivenza. Un’espressione deregolata di YBX2 è stata collegata a una ridotta fertilità maschile ed è stata riportata in firme trascrizionali associate alla biologia tumorale, a supporto del suo impiego come bersaglio meccanicistico per lo studio di vie regolatorie incentrate sull’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MSY2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene YBX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del YBX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto YBX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MSY2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di YBX2 per lo studio della segnalazione di MSY2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni YBX2 critici per la funzione di MSY2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di YBX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MSY2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MSY2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus YBX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MSY2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MSY2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia YBX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio YBX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.