MSK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401633-ACT

RPS6KA5は、ERK1/2およびp38 MAPKシグナル伝達の下流に位置する核内セリン／スレオニンキナーゼである、ミトゲン・ストレス応答性キナーゼ1（MSK1）をコードします。MSK1はCREBやATF1などの転写制御因子をリン酸化し、さらにヒストンH3をリン酸化することでクロマチンを修飾し、細胞外からの刺激を即時早期遺伝子の発現プログラムへと結び付けます。これらの機能を通じて、MSK1は刺激依存的な増殖・分化の制御、炎症関連遺伝子の制御、ならびに細胞ストレス応答に寄与します。MAPK–MSK1シグナルが破綻すると、炎症関連やがんに関わる状況で観察される転写出力の変化と関連することが示されており、RPS6KA5は経路駆動性の遺伝子制御機構を解析するうえで有用な結節点となります。

MSK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RPS6KA5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MSK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RPS6KA5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRPS6KA5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MSK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRPS6KA5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMSK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRPS6KA5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMSK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。