Msi1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404014-ACT

MSI1 codifica la proteina legante l’RNA Musashi 1 (Msi1), un regolatore post-trascrizionale conservato che si lega a motivi di sequenza negli mRNA bersaglio per modulare traduzione, stabilità e decisioni del destino cellulare. Nelle cellule umane, Msi1 sostiene il mantenimento di cellule staminali/progenitrici e influenza i programmi di differenziamento plasmando gli output di segnalazione in vie come Notch e Wnt/β-catenina, oltre a reti più ampie di processamento dell’RNA che controllano proliferazione e impegno di linea. Un’espressione aberrante di MSI1 è stata collegata a crescita disregolata e a stati di differenziamento compromessi in molteplici contesti patologici, rendendolo un marcatore utile e un punto d’ingresso meccanicistico per studiare circuiti trascrizionali e traduzionali di tipo oncogenico. In quanto proteina legante l’RNA, Msi1 è anche rilevante per indagini sulle risposte allo stress e sulla regolazione associata ai granuli di RNA, che possono rimodellare l’espressione genica senza alterare la sequenza del DNA.

Msi1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MSI1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Msi1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MSI1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MSI1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Msi1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MSI1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Msi1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Msi1 nelle cellule tumorali con espressione di MSI1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.