Plasmide CRISPR/Cas9 KO mSHMT (m): sc-430789

Présentation

Shmt2 code la sérine hydroxyméthyltransférase mitochondriale (mSHMT), une enzyme dépendante du phosphate de pyridoxal qui catalyse l’interconversion réversible de la sérine et de la glycine tout en générant du 5,10‑méthylène‑tétrahydrofolate dans le cycle mitochondrial des unités monocarbonées. Cette activité soutient le transfert d’unités à un carbone médié par les folates, nécessaire à la biosynthèse des nucléotides, aux réactions de méthylation et au maintien de l’homéostasie rédox via des liens avec la production de NADPH et le métabolisme mitochondrial. En régulant le flux mitochondrial des folates, SHMT2 influence les programmes prolifératifs, les réponses au stress oxydant et l’adaptation métabolique dans les cellules à division rapide. Des altérations de la fonction de SHMT2 ont été associées à une reprogrammation métabolique et à des défauts de maintenance du génome, pertinents pour l’étude de la biologie tumorale et des dysfonctionnements mitochondriaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mSHMT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Shmt2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Shmt2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Shmt2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mSHMT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Shmt2 pour l'étude de la signalisation de mSHMT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Shmt2 essentiels à la fonction de mSHMT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Shmt2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le mSHMT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le mSHMT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Shmt2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le mSHMT plasmide HDR (m) et le mSHMT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Shmt2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Shmt2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.