Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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mSHMT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430789
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mSHMT Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico mSHMT, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: mSHMT Antibody (F-11): sc-390641
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mSHMT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-430789 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Shmt2 codifica la serina idrossimetiltransferasi mitocondriale (mSHMT), un enzima dipendente dal fosfato di piridossale che catalizza l’interconversione reversibile tra serina e glicina, generando al contempo 5,10-metilene-tetraidrofolato nel ciclo mitocondriale dell’unità a un carbonio. Questa attività sostiene il trasferimento, mediato dai folati, di unità a un carbonio necessarie per la biosintesi dei nucleotidi, le reazioni di metilazione e l’omeostasi redox, grazie anche ai collegamenti con la produzione di NADPH e il metabolismo mitocondriale. Regolando il flusso dei folati nel mitocondrio, SHMT2 influenza programmi proliferativi, risposte allo stress ossidativo e adattamento metabolico nelle cellule in rapida divisione. Alterazioni della funzione di SHMT2 sono state associate a riprogrammazione metabolica e difetti nel mantenimento del genoma, aspetti rilevanti per studi sulla biologia dei tumori e sulla disfunzione mitocondriale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO mSHMT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Shmt2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Shmt2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Shmt2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina mSHMT.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Shmt2 per lo studio della segnalazione di mSHMT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Shmt2 critici per la funzione di mSHMT
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Shmt2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal mSHMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal mSHMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Shmt2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal mSHMT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR mSHMT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Shmt2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Shmt2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.