MSH2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400966-ACT

MSH2は、DNA複製や組換えの過程で生じる塩基‐塩基ミスマッチおよび挿入・欠失ループを認識することでゲノムの完全性を維持する、DNAミスマッチ修復（MMR）機構の中核因子をコードする。ヒトMSH2はMSH6（MutSα）またはMSH3（MutSβ）とヘテロ二量体を形成し、損傷の認識を開始するとともにMLH1/PMS2と連携して下流の修復過程を調整し、MMRを複製忠実度、DNA損傷シグナル伝達、細胞周期チェックポイント応答へと結び付ける。MSH2の破綻または発現調節異常は修復能を低下させ、変異負荷を増大させ、さまざまながん種で特徴的にみられる表現型であるマイクロサテライト不安定性の形成に寄与する。そのためMSH2は、ゲノム維持、変異形成、遺伝毒性ストレスに対する細胞応答を制御する経路において広く研究されている。

MSH2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MSH2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MSH2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MSH2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMSH2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MSH2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMSH2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMSH2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMSH2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMSH2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。