MRP5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402443-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MRP5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MRP5 Double Nickase Plasmid (h) e il MRP5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ABCC5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MRP5 Antibody (E-10): sc-376965
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MRP5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402443-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRP5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402443-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCC5 codifica il trasportatore umano della famiglia ATP-binding cassette MRP5, una pompa di efflusso di membrana plasmatica che esporta anioni organici, inclusi i nucleotidi ciclici (cGMP e cAMP) e vari analoghi nucleotidici. Regolando i pool intracellulari di nucleotidi ciclici, MRP5 modula la segnalazione mediata da secondi messaggeri con effetti a valle sull’attività delle protein chinasi, sulla regolazione dei canali ionici e su programmi trascrizionali che influenzano la proliferazione cellulare e le risposte allo stress. L’attività di ABCC5 è collegata a farmacologia e tossicologia attraverso una diversa gestione cellulare di xenobiotici e antimetaboliti, e la sua disregolazione è stata associata a fenotipi di resistenza multidrug e a contesti di segnalazione legati al cancro. Queste caratteristiche rendono ABCC5/MRP5 un bersaglio rilevante per studiare la biologia dei trasportatori, l’omeostasi dei nucleotidi ciclici e i meccanismi di sensibilità ai composti.
MRP5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABCC5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABCC5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABCC5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABCC5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.