MRP-S18B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412012-ACT

MRPS18B codifica la proteina ribosomiale mitocondriale umana MRP-S18B, un componente della piccola subunità 28S che supporta la traduzione delle proteine della fosforilazione ossidativa codificate dal mitocondrio. Contribuendo alla sintesi proteica mitocondriale, MRP-S18B aiuta a mantenere l’integrità della catena di trasporto degli elettroni, la produzione di ATP e l’omeostasi mitocondriale complessiva. L’alterazione della funzione del mitoribosoma può rimodellare il metabolismo energetico cellulare e aumentare lo stress ossidativo, collegando la biologia associata a MRPS18B a vie che regolano il controllo qualità mitocondriale, la proteostasi e la segnalazione di stress. Una capacità di traduzione mitocondriale alterata è frequentemente osservata in contesti di neurodegenerazione, disfunzioni cardiometaboliche e riprogrammazione metabolica associata al cancro, rendendo MRPS18B un nodo utile per studi meccanicistici.

MRP-S18B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MRPS18B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MRP-S18B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MRPS18B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MRPS18B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MRP-S18B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MRPS18B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MRP-S18B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MRP-S18B nelle cellule tumorali con espressione di MRPS18B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.