MRP-S18A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412466-ACT

MRPS18A codifica la proteina ribosomiale mitocondriale S18A (MRP-S18A), un componente codificato dal nucleo della piccola subunità 28S del mitoribosoma dei mammiferi. MRP-S18A sostiene la traduzione mitocondriale delle subunità della fosforilazione ossidativa (OXPHOS) codificate dal mtDNA, influenzando così la funzione della catena respiratoria, la produzione di ATP e la proteostasi mitocondriale. L’alterazione delle proteine mitoribosomiali può compromettere l’espressione genica mitocondriale, innescare risposte integrate allo stress e modificare la segnalazione metabolica che interseca apoptosi e omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. MRPS18A è quindi rilevante per gli studi sulla disfunzione mitocondriale e sul rimodellamento bioenergetico osservati in molteplici patologie umane, inclusi la neurodegenerazione e l’adattamento metabolico associato al cancro.

MRP-S18A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MRPS18A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MRP-S18A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MRPS18A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MRPS18A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MRP-S18A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MRPS18A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MRP-S18A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MRP-S18A nelle cellule tumorali con espressione di MRPS18A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.